Rad50 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401617-ACT

ヒトRAD50はRad50をコードしており、DNA二本鎖切断を検出してDNA損傷応答シグナル伝達を統括するMRN（MRE11-RAD50-NBN）複合体の中核構成要素です。Rad50のATPアーゼ活性とテザリング（架橋）活性は、切断されたDNA末端同士を橋渡しして結び付け、相同組換え、非相同末端結合、複製フォークの安定性、ならびにテロメア維持を支えます。ATM依存的チェックポイント活性化および末端リセクション制御との機能的連関を介して、RAD50は細胞周期停止やゲノム監視プログラムに影響を及ぼします。MRN複合体活性の破綻やRAD50に関連するDNA修復不全は、ゲノム不安定性の表現型と結び付いており、がん生物学や遺伝性DNA修復疾患の研究で頻繁に取り上げられます。

Rad50 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RAD50の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Rad50 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RAD50 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRAD50転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Rad50の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRAD50遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRad50依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRAD50発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRad50経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。