Plásmido Doble Nickase (h) Rab11-FIP1: sc-407521-NIC

RAB11FIP1 codifica Rab11-FIP1, un efector de la familia Rab11 que coordina el tráfico de los endosomas de reciclaje dependiente de Rab11 y el reciclaje de membrana hacia la membrana plasmática. Mediante interacciones con pequeñas GTPasas y proteínas motoras/adaptadoras, Rab11-FIP1 ayuda a regular el reciclaje de receptores, el transporte polarizado, la citocinesis y el mantenimiento de la arquitectura de las células epiteliales. Estos procesos afectan las salidas de señalización y la motilidad celular al controlar la localización y el recambio de proteínas de membrana, incluidos receptores y moléculas de adhesión. La desregulación del reciclaje endosomal y los programas de tráfico asociados a Rab11-FIP1 se han vinculado con alteraciones del comportamiento proliferativo y migratorio en biología del cáncer, así como con defectos más amplios en las vías de transporte vesicular relevantes para la neurobiología y la regulación metabólica.

Rab11-FIP1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus RAB11FIP1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de RAB11FIP1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de RAB11FIP1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con RAB11FIP1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.