Rab 3B CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403407-ACT

RAB3BはRab 3Bをコードしており、Rab 3Bは神経系および内分泌系で高発現する低分子GTPアーゼで、Ca2+依存的な小胞輸送および刺激に連動したエキソサイトーシスを制御します。GDP結合型とGTP結合型の間を循環する分子スイッチとしてRab 3Bは、Rabエフェクターとの相互作用を介して小胞のドッキングとプライミングを協調し、シナプス小胞ダイナミクスおよび制御分泌経路に寄与します。RAB3Bに関連する小胞輸送ネットワークの変化は、神経内分泌シグナル伝達や分泌依存的な細胞表現型の研究において重要であり、Rab GTPアーゼ回路の破綻は神経疾患やがん関連の文脈でも検討されてきました。そのため本遺伝子は、分泌、神経伝達、ならびに細胞内輸送の忠実性を形作る膜トラフィッキングの制御点を解析するために、一般的に用いられています。

Rab 3B CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RAB3Bの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Rab 3B CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RAB3B 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRAB3B転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Rab 3Bの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRAB3B遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRab 3B依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRAB3B発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRab 3B経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。