Rab 27b CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403498-ACT

RAB27Bは小型GTPアーゼRab27bをコードしており、Rab27bはRabファミリーに属する分子として、分泌小胞が細胞膜にドッキングし、プライミングを経て融合するまでに必要な膜輸送過程を制御します。Rab27bは、シナプトタグミン様タンパク質やRab27特異的結合パートナーなどのエフェクタータンパク質との相互作用を介して、調節性エキソサイトーシス、顆粒成熟、ならびに分泌系・免疫関連の文脈におけるカーゴ放出を統括します。この経路は、血小板の濃染顆粒（dense granule）分泌、内分泌小胞輸送、細胞外小胞／エクソソーム放出の制御などに寄与し、RAB27Bを細胞間コミュニケーションや微小環境シグナル伝達と結び付けます。Rab27b依存的な輸送の破綻は、炎症性疾患やがん生物学における分泌プログラムの変化と関連しており、転移に関わる分泌機構、腫瘍—間質相互作用、免疫調節の機序研究において重要です。

Rab 27b CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RAB27Bの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Rab 27b CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RAB27B 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRAB27B転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Rab 27bの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRAB27B遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRab 27b依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRAB27B発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRab 27b経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。