Plásmido CRISPR de Activación (h) Rab 26: sc-411810-ACT

RAB26 codifica Rab 26, una pequeña GTPasa de la familia Rab que regula el tráfico de membranas coordinando los eventos de gemación, transporte y fusión de vesículas. Rab 26 se ha relacionado con procesos secretorios y endolisosomales, incluida la conducción de la carga a través de vías de reciclaje y degradación y la modulación de la dinámica vesicular en tipos celulares especializados. Al influir en la organización espacial de la maquinaria de tráfico y en la identidad de los compartimentos, RAB26 puede afectar la salida de señalización y la homeostasis celular. La desregulación del tráfico dependiente de las GTPasas Rab se ha asociado con fenotipos neurodegenerativos, el comportamiento de células cancerosas y disfunción inmunitaria, lo que convierte a RAB26 en un nodo relevante para estudiar alteraciones de vías en modelos de enfermedad.

Rab 26 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RAB26 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Rab 26 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RAB26 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RAB26, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Rab 26. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RAB26 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Rab 26 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Rab 26 en células tumorales con expresión de RAB26 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.