Rab 20 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-412563-ACT

RAB20は、エンドサイトーシス系における小型GTPアーゼRab20をコードしており、受容体リサイクリング、エンドソーム成熟、区画化されたシグナル伝達に影響する膜輸送イベントを調整しながら、エンドサイトーシス系内の小胞輸送を制御します。Rab20はGTP結合型とGDP結合型の間を循環することで、細胞骨格ダイナミクスやオルガネラ機能と輸送を結び付けるエフェクターとの相互作用を介し、小胞の出芽、移動、融合の組織化に関与します。RAB20の機能異常を含むRab GTPアーゼネットワーク活性の変調は、複数の実験系において、代謝適応、炎症性シグナル、がん原性表現型といった細胞恒常性の乱れと関連づけられてきました。そのためRAB20は、細胞内輸送とストレス応答、疾患関連の細胞状態をつなぐ経路の研究でしばしば解析対象となっています。

Rab 20 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RAB20の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Rab 20 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RAB20 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRAB20転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Rab 20の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRAB20遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRab 20依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRAB20発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRab 20経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。