Rab 15 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-415722-ACT

RAB15はRab15をコードしており、Rab15はRas関連の小型GTPアーゼとして、GDP結合型とGTP結合型の間を循環しながら、小胞の出芽・輸送・融合を協調させることでエンドソーム膜輸送を制御します。Rab15の活性は、受容体のエンドサイトーシスや、シグナル強度および栄養取り込みを左右するソーティングの決定と関連づけられており、Rab依存的なエンドサイトーシス後のリサイクリングやリソソーム標的化プロセスとも交差します。エンドソーム動態における役割を通じて、Rab15は細胞代謝、膜受容体の恒常性、区画特異的なシグナル伝達を制御する経路に影響を与え得ます。Rab15を含むエンドサイトーシス関連Rabタンパク質の発現や機能の変化は、輸送依存的な表現型が顕著な、がん性シグナル伝達の再配線、神経生物学、免疫細胞制御といった文脈で頻繁に研究対象となっています。

Rab 15 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RAB15の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Rab 15 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RAB15 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRAB15転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Rab 15の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRAB15遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRab 15依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRAB15発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRab 15経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。