Rab 14 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402109-ACT

RAB14は、RASスーパーファミリーに属する小型GTPaseであるRab14をコードしており、GDP結合型とGTP結合型の間をサイクルすることで、膜輸送を協調的に制御します。Rab14は、小胞の出芽、輸送、融合を調節します。Rab14は、トランスゴルジネットワーク（TGN）、初期／リサイクリングエンドソーム、そして細胞膜の間におけるエンドサイトーシス後のリサイクリングおよび生合成輸送を制御し、カーゴの選別、受容体のターンオーバー、極性をもった輸送に影響を与えます。これらの過程を通じて、RAB14は細胞極性の維持、栄養トランスポーターの分布、シグナル伝達ダイナミクスの調節に寄与します。Rab14が制御する輸送の変化は、複数の疾患状況で観察される増殖・遊走プログラムの破綻と関連づけられており、そのため小胞輸送依存性の表現型を機構的に研究する上で有用な標的（ノード）とされています。

Rab 14 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RAB14の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Rab 14 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RAB14 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRAB14転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Rab 14の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRAB14遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRab 14依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRAB14発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRab 14経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。