R7BP CRISPR Activationプラスミド (h): sc-415971-ACT

RGS7BPはR7BPをコードしており、R7BPは膜アンカー型の補助サブユニットとして、RGS7/RGS9などR7ファミリーのRGSタンパク質に結合し、Gタンパク質共役受容体（GPCR）シグナル伝達におけるそれらの局在と活性を調節します。膜へのターゲティングと複合体の安定性を促進することで、R7BPはGi/oを介したシグナル終結や、cAMPおよび興奮性細胞におけるイオンチャネル調節を含む下流のセカンドメッセンジャー動態に影響を与えます。この調節軸は神経シグナルの統合やシナプス可塑性に関与しており、RGS7BP関連シグナルの変調は、GPCR経路制御の破綻を介して神経精神疾患および神経変性疾患の病態生物学と関連づけられています。そのためRGS7BPは、GPCRシグナルの反応速度（キネティクス）、膜トラフィッキング、ならびに神経ネットワークの応答性を解析するための分子学的な足がかりとして利用されています。

R7BP CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RGS7BPの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

R7BP CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RGS7BP 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRGS7BP転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性R7BPの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRGS7BP遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるR7BP依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRGS7BP発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるR7BP経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。