R-Spondin3 Double Nickaseプラスミド (m2): sc-428439-NIC-2
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- R-Spondin3 Double Nickaseプラスミド (m2)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- R-Spondin3ダブルニカースプラスミド（m2）およびR-Spondin3ダブルニカースプラスミド（m22）は、Rspo3を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
R-Spondin3 Double Nickaseプラスミド (m2) | sc-428439-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
マウスRspo3はR‑Spondin3をコードしており、これは分泌性のマトリセルラーリガンドとしてLGR受容体に結合し、ZNRF3/RNF43ユビキチンリガーゼ複合体を抑制して細胞表面のFrizzled/LRP受容体を安定化することで、カノニカルWNT/βカテニンシグナル伝達を増強する。Rspo3は胚発生における形態形成、血管発生、組織パターニング、幹／前駆細胞の維持に中心的な役割を担い、細胞外マトリックスからのシグナルと統合されながら上皮—間葉転換や血管新生プログラムを制御する。RSPO3–WNT軸の活性が破綻すると、異常な器官形成や病的な組織リモデリングに関与するとされ、腫瘍形成や線維化に関連する状況も報告されている。このためRspo3は、ゲノム編集、レポーターアッセイ、オルガノイド解析や内皮分化研究などを通じて、WNT経路の制御、ニッチシグナル、発生遺伝子ネットワークを解析する目的で、マウスモデルおよびin vitro系で広く用いられている。
R-Spondin3 ダブルニカースプラスミド（m2）は、mouse 細胞株における Rspo3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Rspo3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Rspo3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Rspo3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。