QTRT1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-413456

Panoramica

QTRT1 codifica la subunità catalitica della tRNA-guanina transglicosilasi, un enzima necessario per la modifica a queuosina nella posizione wobble di specifici tRNA citosolici. Questo processo di editing dei tRNA sostiene l’accuratezza e l’efficienza della traduzione, influenzando la sintesi proteica con bias di codone, la proteostasi e, più in generale, il metabolismo dell’RNA. Attraverso il suo ruolo nel mantenimento dell’omeostasi delle modifiche dei tRNA, QTRT1 collega il recupero (salvage) della queuina dipendente dai nutrienti alle risposte cellulari allo stress e alle vie di controllo della crescita. La deregolazione delle modifiche dei tRNA e della macchina di traduzione è stata associata a fenotipi rilevanti per la funzione mitocondriale, la sensibilità allo stress ossidativo e i programmi proliferativi, rendendo QTRT1 un nodo utile per studi meccanicistici della biologia delle modificazioni dell’RNA.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO QTRT1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene QTRT1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del QTRT1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto QTRT1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina QTRT1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di QTRT1 per lo studio della segnalazione di QTRT1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni QTRT1 critici per la funzione di QTRT1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di QTRT1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal QTRT1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal QTRT1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus QTRT1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal QTRT1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR QTRT1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia QTRT1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio QTRT1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.