QP-C Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423624

Panoramica

Uqcrq codifica QP-C, una piccola subunità accessoria del complesso III della catena respiratoria mitocondriale (ubichinolo–citocromo c reduttasi) che supporta l’assemblaggio e la stabilità del complesso citocromo bc1 nella membrana mitocondriale interna. Influenzando il trasferimento di elettroni dall’ubichinolo al citocromo c, QP-C contribuisce alla fosforilazione ossidativa, al mantenimento del potenziale di membrana mitocondriale e all’equilibrio redox cellulare. L’alterazione dei componenti del complesso III può compromettere la produzione di ATP e aumentare le specie reattive dell’ossigeno mitocondriali, collegando i processi dipendenti da Uqcrq alle risposte allo stress bioenergetico e alla segnalazione dell’apoptosi. Nei sistemi murini, Uqcrq è quindi rilevante per studi meccanicistici sulla disfunzione mitocondriale in tessuti metabolicamente attivi e per modellare vie implicate in fenotipi neuromuscolari e cardiometabolici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO QP-C (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Uqcrq in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Uqcrq insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Uqcrq a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina QP-C.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Uqcrq per lo studio della segnalazione di QP-C, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Uqcrq critici per la funzione di QP-C
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Uqcrq per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal QP-C CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal QP-C CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Uqcrq. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal QP-C Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR QP-C (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Uqcrq per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Uqcrq definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.