pyridoxal phosphatase Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406810

Panoramica

PDXP codifica la piridossalfosfatasi, un enzima citosolico che idrolizza il piridossal 5′-fosfato (PLP), la forma attiva della vitamina B6, contribuendo così al controllo cellulare della disponibilità di PLP e all’omeostasi dei vitameri della B6. Poiché il PLP è un cofattore essenziale per numerose aminotransferasi, decarbossilasi ed enzimi coinvolti nel metabolismo a un carbonio e nel metabolismo legato ai neurotrasmettitori, l’attività di PDXP può influenzare indirettamente il turnover degli amminoacidi e flussi metabolici più ampi. Grazie al suo ruolo nel mantenimento dell’equilibrio dei cofattori, PDXP è rilevante per studi sull’adattamento metabolico, sulle vie collegate allo stato redox e sulla regolazione enzima-cofattore. Alterazioni del metabolismo dipendente dal PLP sono state implicate in diversi contesti rilevanti per la malattia, rendendo PDXP un bersaglio utile per indagini meccanicistiche dei fenotipi cellulari associati al metabolismo.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO pyridoxal phosphatase (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PDXP in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PDXP insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PDXP a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina pyridoxal phosphatase.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PDXP per lo studio della segnalazione di pyridoxal phosphatase, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PDXP critici per la funzione di pyridoxal phosphatase
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PDXP per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal pyridoxal phosphatase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal pyridoxal phosphatase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PDXP. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal pyridoxal phosphatase Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR pyridoxal phosphatase (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PDXP per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PDXP definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.