PYK2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400708-ACT

PTK2Bは、非受容体型チロシンキナーゼであるPYK2（protein tyrosine kinase 2 beta）をコードしており、Ca2+およびインテグリン応答性のシグナル伝達ハブとして、細胞外からの刺激を細胞骨格の再構築や遺伝子発現へとつなぎます。PYK2は、フォーカルアドヒージョンやアクチンダイナミクスの経路に関与し、SrcファミリーキナーゼやMAPK/ERKシグナル、さらに接着・遊走・炎症応答を制御する下流の転写プログラムとも連携します。免疫系および骨髄系の細胞系列では、PYK2がケモカイン／サイトカイン駆動のシグナル伝達を調節し、自然免疫の活性化や白血球の移動（トラフィッキング）に寄与します。PTK2B/PYK2シグナルの異常は、神経炎症・神経変性に関わる機序、自己免疫に関連するシグナルネットワーク、腫瘍細胞の浸潤といった文脈で示唆されており、経路撹乱（perturbation）研究の標的として有用です。

PYK2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PTK2Bの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PYK2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PTK2B 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPTK2B転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PYK2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPTK2B遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPYK2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPTK2B発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPYK2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。