PYGL CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401950-ACT

ヒトのPYGLは、グリコーゲンホスホリラーゼの肝臓アイソフォームをコードしており、グリコーゲンをリン酸分解してグルコース-1-リン酸を生成する重要な細胞質酵素である。生成されたグルコース-1-リン酸は、その後の解糖系や全身のグルコース恒常性の維持に利用される。PYGLの活性は、ホルモンおよび栄養シグナルをグリコーゲン分解やより広範な糖質代謝と統合し、絶食時や代謝ストレス下における細胞のエネルギーバランスに寄与する。肝臓におけるグリコーゲン分解の異常は、グリコーゲン代謝の先天性異常と関連し、インスリン抵抗性や肝機能に関わる代謝表現型にも影響し得る。グリコーゲン貯蔵と中心炭素代謝をつなぐ経路上の要所として、PYGLは肝臓生物学、代謝フラックス制御、エネルギー感知ネットワークの研究で広く解析されている。

PYGL CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PYGLの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PYGL CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PYGL 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPYGL転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PYGLの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPYGL遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPYGL依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPYGL発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPYGL経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。