PXDN Double Nickaseプラスミド (h): sc-404707-NIC

PXDN（peroxidasin）は、細胞外マトリックスに局在するヘムペルオキシダーゼをコードし、コラーゲンIVにおけるスルフィリミン架橋の形成を触媒することで、基底膜の組み立てと組織の健全性維持を支えます。過酸化物依存的な化学反応とハロゲン化物の利用を介して、PXDNはレドックス恒常性および細胞外マトリックスのリモデリングに寄与し、細胞接着、遊走、発生過程の形態形成に影響を与えます。PXDNの活性や発現の変化は、基底膜構築の異常や眼／血管系の表現型と関連づけられており、線維化、炎症に伴うリモデリング、酸化ストレス応答の研究において重要です。そのためPXDNは、細胞外マトリックスの安定性とレドックスシグナル、ならびに上皮—間葉相互作用を結び付ける経路の研究で広く解析されています。

PXDN ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における PXDN 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、PXDN内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、PXDNの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、PXDNが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。