Puratrophin 1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-411825

Panoramica

PLEKHG4 codifica la Puratrophin 1, una proteina multidominio coinvolta nella regolazione neuronale e del citoscheletro tramite la segnalazione delle GTPasi della famiglia Rho. In quanto presunta proteina correlata ai fattori di scambio di nucleotidi della guanina (GEF) per Rho, è associata alla modulazione della dinamica dell’actina, del traffico di membrana e dell’architettura dei neuriti, processi centrali per il mantenimento delle sinapsi e il trasporto intracellulare. L’espressione di PLEKHG4 è arricchita nel sistema nervoso, a supporto di un ruolo nello sviluppo neuronale e nella stabilità dei circuiti. Varianti genetiche e alterazioni funzionali della Puratrophin 1 sono state associate a fenotipi neurodegenerativi e a disturbi del movimento, inclusa l’atassia spinocerebellare, stimolando studi meccanicistici in modelli cellulari pertinenti.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Puratrophin 1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PLEKHG4 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PLEKHG4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PLEKHG4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Puratrophin 1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PLEKHG4 per lo studio della segnalazione di Puratrophin 1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PLEKHG4 critici per la funzione di Puratrophin 1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PLEKHG4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Puratrophin 1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Puratrophin 1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PLEKHG4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Puratrophin 1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Puratrophin 1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PLEKHG4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PLEKHG4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.