PUMAα/β Plasmide Double Nickase (h): sc-400464-NIC

BBC3 codifica PUMAα/β (p53 upregulated modulator of apoptosis), una proteina della famiglia BCL-2 "BH3-only" che funge da potente iniziatore dell'apoptosi mitocondriale intrinseca. PUMA promuove la permeabilizzazione della membrana esterna del mitocondrio neutralizzando le proteine anti-apoptotiche BCL-2 e attivando BAX/BAK, con conseguente rilascio di citocromo c e attivazione delle caspasi. La sua espressione è indotta a livello trascrizionale da p53 in risposta a danni al DNA e ad altri stress cellulari, collegando la segnalazione genotossica all'impegno apoptotico; inoltre si integra con programmi più ampi di risposta allo stress che influenzano le decisioni sul destino cellulare. Una deregolazione della segnalazione BBC3/PUMA è implicata nella biologia dei tumori, nella neurodegenerazione e in contesti di danno tissutale, in cui soglie apoptotiche alterate contribuiscono a fenotipi associati alla malattia.

PUMAα/β Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus BBC3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di BBC3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di BBC3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con BBC3 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.