PTPζ CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401775-ACT

PTPRZ1は、タンパク質チロシンホスファターゼ受容体Z1型（PTPζ）をコードしています。PTPζは中枢神経系に豊富に発現する受容体様ホスファターゼで、細胞表面におけるチロシンリン酸化状態を調節します。PTPζは、プレイオトロフィンやミドカインなどのリガンドからの細胞外シグナルを統合し、細胞接着、遊走、神経突起伸長に影響を与えるとともに、SRCファミリーキナーゼ、MAPK/ERK、PI3K/AKT経路を含むシグナル伝達ネットワークと連関します。グリア細胞や神経前駆細胞の振る舞いを制御することで、PTPRZ1は神経組織における発生過程および活動依存的なプロセスに寄与します。PTPRZ1の発現やシグナル伝達の異常は、神経炎症状態、脱髄性病変、グリオーマの生物学と関連づけられており、神経シグナル伝達や微小環境相互作用の機序解析における研究対象としての有用性を示しています。

PTPζ CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PTPRZ1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PTPζ CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PTPRZ1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPTPRZ1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PTPζの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPTPRZ1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPTPζ依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPTPRZ1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPTPζ経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。