PTPκ CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402287-ACT

PTPRKは、タンパク質チロシンホスファターゼ受容体型K（PTPκ）をコードしており、PTPκは形質膜および細胞間接着部位におけるリン酸化依存的シグナル伝達を調節する受容体様ホスファターゼです。接着や増殖因子シグナルに関与する基質を脱リン酸化することで、PTPκは上皮の完全性、接触阻害、ならびに細胞骨格の構築の制御に寄与します。PTPRKの活性は、接着帯（アドヘレンスジャンクション）の動態や受容体型チロシンキナーゼの出力に関連する経路と交差し、増殖および遊走プログラムに影響を与えます。PTPRKの発現や機能の変化は、複数の疾患状況で観察されるシグナル伝達ネットワークの破綻と関連付けられており、細胞シグナル伝達および細胞間接着（ジャンクション）生物学の研究における機構的標的としての有用性を支持します。

PTPκ CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PTPRKの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PTPκ CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PTPRK 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPTPRK転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PTPκの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPTPRK遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPTPκ依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPTPRK発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPTPκ経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。