PTH CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422490

Übersicht

Das murine Pth-Gen kodiert das Parathormon (PTH), ein sezerniertes Peptid, das den systemischen Calcium- und Phosphathaushalt aufrechterhält, indem es über den PTH1-Rezeptor signalisiert und so den Knochenumbau, die tubuläre Rückresorption in der Niere sowie die Phosphatausscheidung reguliert. Die durch PTH ausgelöste GPCR-Signalübertragung aktiviert die cAMP/PKA- und PLC/PKC-Signalwege und beeinflusst die Kopplung zwischen Osteoblasten und Osteoklasten über nachgeschaltete Mediatoren wie RANKL und OPG. Unter physiologischen Bedingungen integriert die Pth-Expression Rückkopplungssignale aus dem zirkulierenden Calciumspiegel und dem Vitamin-D-Stoffwechsel, um die Homöostase der Mineralionen zu koordinieren. Eine fehlregulierte PTH-Signalisierung ist für die Forschung zum Skelettumbau, zu Störungen des Mineralstoffwechsels und zur endokrinen Regulation der Kommunikation zwischen Niere und Knochen von breiter Bedeutung.

Das PTH CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Pth-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Pth-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Pth nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PTH-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Pth-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PTH-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Pth-Exone abzielen, die für die PTH-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Pth-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PTH CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom PTH CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Pth-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PTH HDR-Plasmid (m) und PTH HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Pth-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Pth-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.