PSPH CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403897-ACT

ホスホセリンホスファターゼ（PSPH）は細胞質に存在する酵素で、リン酸化セリン生合成経路の最終段階を触媒し、L-ホスホセリンをL-セリンへと変換します。de novoのセリン利用可能量を制御することで、PSPHはワンカーボン代謝、ヌクレオチド合成、レドックス恒常性、さらに増殖やストレス適応型の細胞プログラムを支える下流の脂質・アミノ酸代謝に影響を及ぼします。PSPH活性は、急速に分裂する細胞や栄養制限下の微小環境で一般的に研究される代謝リプログラミングとも関わっており、セリンフラックスがエピジェネティック制御や酸化ストレス応答を規定し得ます。PSPH発現の異常は、代謝や増殖制御が変化した状況で検討されており、代謝経路依存性の機構研究において重要な対象となっています。

PSPH CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PSPHの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PSPH CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PSPH 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPSPH転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PSPHの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPSPH遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPSPH依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPSPH発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPSPH経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。