PSMC2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405022-ACT

PSMC2は、ユビキチン依存的なタンパク質分解を担う26Sプロテアソームの制御サブユニット7（Rpt1）をコードしている。Rpt1は19S制御粒子に含まれるAAA+ ATPアーゼであり、基質タンパク質のアンフォールディングと、20Sコアへの移送（トランスロケーション）を駆動する。プロテオスタシス（タンパク質恒常性）の制御を介して、PSMC2は細胞周期の進行、DNA損傷応答、ストレスシグナル伝達、抗原プロセシングに影響し、ユビキチン‐プロテアソーム系によるターンオーバー、NF-κB制御、タンパク質毒性ストレスへの適応などの経路と統合される。プロテアソーム活性や制御サブユニット発現の変化は、さまざまな疾患状況で観察される増殖形質やチェックポイント制御の破綻としばしば関連しており、そのためPSMC2はタンパク質品質管理と制御ネットワークの再構築を研究するうえで有用な結節点となる。したがって、PSMC2量を摂動させることで、ATP依存的なプロテアソーム機能が転写プログラムや細胞の適応度（フィットネス）をどのように形作るかを検証できる。

PSMC2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PSMC2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PSMC2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PSMC2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPSMC2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PSMC2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPSMC2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPSMC2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPSMC2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPSMC2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。