PSGL-1 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-401534-LAC

SELPLG codifica o ligante-1 da glicoproteína P-selectina (PSGL-1), uma sialomucina do tipo mucina expressa em leucócitos que medeia a ancoragem e o rolamento sobre o endotélio ativado por meio de interações com P-selectina e E-selectina. Ao coordenar a adesão dependente de selectinas sob fluxo de cisalhamento, o PSGL-1 ajuda a regular o tráfego de leucócitos, a extravasão e o posicionamento de células imunes em tecidos inflamados, convergindo com vias que controlam a adesão célula–célula, a migração dirigida por quimiocinas e a sinalização inflamatória. Alterações na função do PSGL-1 ou no seu estado de glicosilação podem mudar a dinâmica de recrutamento de leucócitos e têm sido estudadas no contexto de condições inflamatórias crônicas, inflamação vascular e desregulação imune relevantes para pesquisas em oncologia e autoimunidade.

As Partículas de Ativação Lentivirais PSGL-1 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de SELPLG numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais PSGL-1 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição SELPLG, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de PSGL-1. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo SELPLG e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.