Plásmido Doble Nickase (h) PSGL-1: sc-401534-NIC

SELPLG codifica el ligando 1 de la glicoproteína P-selectina (PSGL-1), una glicoproteína de superficie celular tipo mucina, sialilada y fucosilada, expresada en la mayoría de los leucocitos, que media el anclaje y el rodamiento sobre el endotelio activado mediante su unión a las selectinas P, E y L. A través de su papel en la adhesión dependiente de selectinas, PSGL-1 coordina los pasos iniciales del reclutamiento leucocitario, la transmigración y el tráfico de células inflamatorias, integrándose con la señalización de quimiocinas y la activación de integrinas para estabilizar las interacciones entre leucocitos y endotelio. PSGL-1 también participa en la comunicación cruzada entre leucocitos y plaquetas y puede influir en programas posteriores de activación inmunitaria al modular señales dependientes del contacto celular. La biología desregulada de PSGL-1–selectina se ha implicado en trastornos inflamatorios crónicos, inflamación vascular, reclutamiento leucocitario asociado a trombosis y contextos de investigación sobre metástasis asociada al cáncer, lo que convierte a SELPLG en una diana útil para estudios mecanísticos de adhesión y regulación inmunitaria.

PSGL-1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SELPLG en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SELPLG. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SELPLG. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SELPLG alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.