Psf3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406717

Panoramica

GINS3 codifica Psf3, una subunità centrale del complesso GINS eterotetramerico, che coopera con CDC45 e con l’elicasi MCM2–7 per formare l’elicasi replicativa CMG, necessaria per l’attivazione delle origini e per una replicazione del DNA processiva. Sostenendo l’avanzamento della forcella replicativa e il coordinamento con la segnalazione del checkpoint della fase S, Psf3 contribuisce a mantenere la stabilità del genoma durante la progressione del ciclo cellulare. L’alterazione dell’attività del complesso GINS è associata a stress replicativo, a una capacità proliferativa modificata e a risposte al danno al DNA, aspetti spesso sfruttati negli studi sulla trasformazione oncogena. In quanto fattore di replicazione con espressione regolata dal ciclo cellulare, GINS3 è ampiamente utilizzato come punto di ingresso molecolare per indagare la dinamica della replicazione, l’assemblaggio del replisoma associato alla cromatina e i pathway che salvaguardano l’integrità del DNA.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Psf3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene GINS3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del GINS3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto GINS3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Psf3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di GINS3 per lo studio della segnalazione di Psf3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni GINS3 critici per la funzione di Psf3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di GINS3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Psf3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Psf3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus GINS3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Psf3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Psf3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia GINS3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio GINS3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.