PSD-95 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400830-NIC

DLG4はPSD-95（postsynaptic density protein 95）をコードしており、PSD-95はMAGUKファミリーの主要な足場（スキャフォールド）タンパク質として、NMDA受容体、AMPA受容体複合体、および関連するシグナル伝達タンパク質をシナプス後肥厚部（PSD）に集積させることで興奮性シナプスを組織化します。PSD-95はPDZ、SH3、GK各ドメインを介して、シナプス成熟、受容体輸送、活動依存的可塑性を制御し、グルタミン酸作動性伝達を樹状突起スパインの構造やカルシウム依存性シグナルを形作る下流経路へと結び付けます。PSD-95を中心とする複合体の攪乱は、シナプス結合性やネットワーク興奮性の変化と関連しており、そのためDLG4は神経発達・神経精神疾患の機序を研究する際の、広く用いられる分子学的な入口（ターゲット）となっています。ヒト神経系モデルでは、DLG4の機能はしばしば、シナプス形成、興奮性／抑制性バランス、受容体‐スキャフォールド間シグナルの動態を解明する目的で検証されます。

PSD-95 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における DLG4 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、DLG4内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、DLG4の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、DLG4が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。