PSCA CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402050-ACT

前立腺幹細胞抗原（PSCA）は、Ly6/uPARファミリーに属するグリコシルホスファチジルイノシトール（GPI）アンカー型の細胞表面タンパク質であり、上皮の分化、接着、および細胞間シグナル伝達に関与します。ヒト組織では、PSCAの発現は前立腺やその他の上皮コンパートメントで高く、細胞表面における膜ミクロドメインの構造や受容体関連シグナル伝達を調節し得ます。PSCAの発現異常は複数の上皮性悪性腫瘍で報告されており、腫瘍細胞の状態、系譜プログラム、ならびに微小環境との相互作用を解析するための分子マーカーとして利用されています。そのためPSCAは、がん生物学における細胞同一性、膜近傍シグナル伝達、転写制御の研究に関連性の高い分子です。

PSCA CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PSCAの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PSCA CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PSCA 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPSCA転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PSCAの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPSCA遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPSCA依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPSCA発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPSCA経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。