PRX2 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-422788-ACT

マウスPrrx2は、発生過程において間葉系としてのアイデンティティ、細胞運命の決定、ならびに組織パターニングを制御する遺伝子プログラムを調節する、paired-related homeobox型転写因子PRX2をコードします。PRX2は、上皮‐間葉転換（EMT）に関連するプロセス、細胞外マトリックス（ECM）のリモデリング、そして細胞移動性を協調させる転写ネットワークに関与し、その下流で分化や創傷に伴う間質応答にも影響を及ぼします。PRRX2活性の制御異常は、疾患に関連する状況において系譜コミットメントの変化や浸潤性表現型と関連することが報告されており、転写可塑性を研究するうえで有用な結節点（ノード）となります。核内のDNA結合タンパク質として、PRX2が発生シグナルをクロマチン状態依存的な転写制御とどのように統合しているかは、しばしば研究対象となっています。

PRX2 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Prrx2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PRX2 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Prrx2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPrrx2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PRX2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPrrx2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPRX2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPrrx2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPRX2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。