PRX IV Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-424704

Descripción general

Prdx4 codifica la peroxirredoxina IV (PRX IV), una peroxidasa dependiente de tioles localizada en el retículo endoplásmico que reduce el peróxido de hidrógeno y los hidroperóxidos orgánicos para mantener la homeostasis redox en células secretoras y en células productoras de proteínas de membrana. En la luz del RE, PRX IV ayuda a configurar el plegamiento oxidativo de proteínas al acoplar la desintoxicación de peróxidos a la formación de enlaces disulfuro, influyendo en la proteostasis y en la señalización de la respuesta a proteínas mal plegadas durante el estrés del RE. Mediante el control de las especies reactivas de oxígeno locales, PRX IV puede modular vías sensibles al estado redox que afectan a la inflamación, la supervivencia celular y la adaptación metabólica. El desequilibrio redox del RE y la actividad de PRX IV desregulados se han asociado con fenotipos vinculados al estrés oxidativo relevantes para la biología del cáncer, las enfermedades metabólicas y los procesos inflamatorios, lo que convierte a Prdx4 en un nodo útil para estudios mecanísticos en sistemas murinos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PRX IV (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Prdx4 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Prdx4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Prdx4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PRX IV.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Prdx4 para la investigación de la señalización de PRX IV, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Prdx4 críticos para la función de PRX IV
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Prdx4 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PRX IV CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido PRX IV CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Prdx4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PRX IV (m) y el plásmido HDR PRX IV (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Prdx4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Prdx4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.