PRP19 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404130-ACT

PRPF19 codifica a proteína humana PRP19, um componente central do complexo PRP19/CDC5L que acopla o splicing de pré‑mRNA à manutenção do genoma. A PRP19 atua como plataforma de montagem e como ligase de ubiquitina E3 na ativação do espliceossoma, e tem sido implicada na coordenação entre transcrição, processamento de RNA e sinalização da resposta a danos no DNA para preservar a fidelidade da replicação. Por meio dessas funções, a atividade de PRPF19 influencia a progressão do ciclo celular e vias de proteostase que moldam a tolerância da célula ao estresse. A desregulação de programas de splicing e reparo de DNA associados a PRPF19 é frequentemente estudada no contexto de transformação oncogênica, neurodegeneração e outros distúrbios em que o metabolismo de RNA e a estabilidade genômica estão comprometidos.

PRP19 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PRPF19 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PRP19 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PRPF19 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PRPF19, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PRP19. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PRPF19 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PRP19 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PRP19 em células tumorais com expressão de PRPF19 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.