Prothrombin Double Nickaseプラスミド (h): sc-400962-NIC

F2 はヒトのプロトロンビンをコードしており、プロトロンビンはビタミンK依存性のザイモーゲンとして、タンパク質分解によりトロンビンへと変換され、凝固カスケードの中核となる段階を駆動します。トロンビンはフィブリノゲンをフィブリンへ切断し、第V、VIII、XI、XIII因子の活性化を介して血栓形成を増幅するとともに、プロテアーゼ活性化受容体（PAR）を通じてシグナルを伝達し、血小板活性化や血管の炎症応答を協調的に制御します。プロトロンビンの産生と成熟は、肝臓における分泌過程でのプロセシングと γ-カルボキシル化に依存しており、F2 の制御は栄養状態や小胞体の品質管理機構と結び付いています。F2 活性の破綻や遺伝的多様性は、血栓症および止血バランス異常の文脈で広く研究されており、細胞モデルおよび in vivo モデルにおける凝固経路ダイナミクスを機序的に解析するための重要な足がかりを提供します。

Prothrombin ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における F2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、F2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、F2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、F2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。