Prothrombin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400962-ACT

F2はプロトロンビンをコードしており、プロトロンビンはビタミンK依存性のチモーゲンとして合成されたのち、タンパク質分解により凝固カスケードの中心的セリンプロテアーゼであるトロンビンへと変換されます。トロンビンはフィブリノゲンを切断してフィブリンを生成するほか、第V、VIII、XI、XIII因子の活性化を介して凝固反応を増幅し、さらに血小板や血管細胞におけるプロテアーゼ活性化受容体（PAR）シグナル伝達を通じて、止血反応を細胞応答と結び付けます。プロトロンビン活性化の制御は、アンチトロンビンやプロテインC系などの抗凝固経路とも交差しており、トロンビン産生の動態や血栓の安定性を規定します。F2の発現または活性の破綻は凝固バランスの乱れや血栓性表現型と関連しており、止血および炎症関連の血管生物学を研究するうえでの機序的ハブとして有用であることを示しています。

Prothrombin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性F2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Prothrombin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における F2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はF2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Prothrombinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のF2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるProthrombin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびF2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるProthrombin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。