PRL-R Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-422418-LAC

O gene Prlr do camundongo codifica o receptor de prolactina (PRL-R), um receptor de citocinas de classe I que medeia a sinalização dependente de prolactina no desenvolvimento da glândula mamária, na fisiologia reprodutiva, na regulação metabólica e na função de células imunes. A ligação do ligante promove a dimerização do receptor e a ativação de JAK2, com programas transcricionais a jusante mediados por STAT5, e também pode interagir com as vias PI3K/AKT e MAPK/ERK para influenciar proliferação, diferenciação e sobrevivência. A sinalização via PRL-R contribui para a comunicação cruzada entre redes endócrinas e inflamatórias, tornando Prlr um ponto útil para estudar transcrição responsiva a hormônios, especificação de linhagens epiteliais e a dinâmica de sinalização de receptores do tipo citocina. Alterações na atividade da via PRL-R têm sido associadas à remodelação tecidual desregulada e ao controle anômalo do crescimento em contextos responsivos a hormônios, apoiando pesquisas mecanísticas em modelos de biologia endócrina e mamária.

As Partículas de Ativação Lentivirais PRL-R (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Prlr numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais PRL-R (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Prlr, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de PRL-R. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Prlr e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.