PRDM9 Double Nickaseプラスミド (h): sc-412740-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- PRDM9 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- PRDM9ダブルニカースプラスミド（h）およびPRDM9ダブルニカースプラスミド（h2）は、PRDM9を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
PRDM9 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-412740-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PRDM9 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-412740-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PRDM9は、減数分裂特異的なヒストンリジンメチルトランスフェラーゼ兼DNA結合因子をコードしており、配列モチーフを認識してH3K4me3およびH3K36me3のマークを付加することで、組換えホットスポットの位置を規定します。PRDM9はKRAB、PR/SET、亜鉛フィンガー各ドメインを介して、クロマチンリモデリングと減数分裂組換え機構のリクルートを協調させ、プログラムされた二本鎖切断の形成と相同染色体の適切な対合を開始します。PRDM9の亜鉛フィンガー配列の多様性は、ホットスポット利用とクロスオーバー分布を左右する主要因であり、PRDM9の機能をゲノム安定性および生殖生物学と結び付けています。PRDM9活性の制御異常や異所性発現は、異常なエピジェネティック・パターン形成やゲノム再編成の観点からも検討されており、突然変異過程や生殖系列の完全性を研究するうえで重要です。
PRDM9 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における PRDM9 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、PRDM9内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、PRDM9の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、PRDM9が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。