Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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PRC1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-401679-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- PRC1 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- PRC1ダブルニカースプラスミド（h）およびPRC1ダブルニカースプラスミド（h2）は、PRC1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: PRC1 抗体 (C-1): sc-376983
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
PRC1 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-401679-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PRC1 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-401679-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PRC1（protein regulator of cytokinesis 1）は、紡錘体中央部（ミッドゾーン）で逆平行な微小管同士を架橋する、保存性の高い微小管結合タンパク質であり、中心紡錘体の形成、分裂溝の位置決定、そして細胞質分裂の完了に必須です。PRC1の活性は、有糸分裂キナーゼやモータータンパク質と協調して制御され、正確な染色体分配とアブシジョン（最終切断）を保証することで、PRC1は細胞周期および有糸分裂紡錘体の中核的経路と結び付いています。PRC1の発現や機能の異常は、細胞分裂の忠実性やゲノム安定性を乱し得ますが、これらは増殖性疾患や腫瘍生物学の文脈でよく研究される特徴です。そのためPRC1は、ヒト細胞における有糸分裂の進行、紡錘体構築、ならびに細胞質分裂チェックポイント制御を解析するための分子レベルの入口として広く利用されています。
PRC1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における PRC1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、PRC1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、PRC1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、PRC1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。