PRAT4A Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404775

Panoramica

CNPY3 codifica PRAT4A, un co-chaperone residente nel reticolo endoplasmatico che supporta la maturazione e il controllo qualità dei recettori Toll-like (TLR) e di recettori dell’immunità innata correlati. PRAT4A partecipa a processi precoci della via secretoria che regolano il ripiegamento dei recettori, la glicosilazione e il traffico verso gli endosomi o la membrana plasmatica, influenzando così la segnalazione infiammatoria guidata da NF-κB e IRF. Alterazioni della funzione di PRAT4A possono perturbare la responsività dei recettori di riconoscimento dei pattern e i programmi citochinici, collegando la biologia di CNPY3 a studi su infezione, infiammazione e disregolazione immunitaria. Il suo ruolo nella biogenesi dei recettori lo rende inoltre rilevante per analizzare le reti di proteostasi del RE e gli stati di segnalazione innata специфici di determinati tipi cellulari.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PRAT4A (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CNPY3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CNPY3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CNPY3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PRAT4A.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CNPY3 per lo studio della segnalazione di PRAT4A, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CNPY3 critici per la funzione di PRAT4A
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CNPY3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PRAT4A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PRAT4A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CNPY3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PRAT4A Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PRAT4A (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CNPY3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CNPY3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.