Partículas Lentivirales de Activación (h) PRAME: sc-404682-LAC

PRAME (antígeno expresado preferentemente en melanoma) codifica un antígeno cáncer-testículo que actúa principalmente como regulador transcripcional, caracterizado sobre todo como un represor dominante de la señalización del receptor de ácido retinoico. Al modular programas de expresión génica dependientes de retinoides, PRAME puede influir en vías de diferenciación, proliferación y supervivencia celular, incluso en contextos en los que el ácido retinoico normalmente favorece la maduración o limita el crecimiento. Se ha descrito una expresión aberrante de PRAME en múltiples tipos de tumores y con frecuencia se utiliza como marcador molecular en estudios de inmunobiología tumoral y presentación de antígenos. En tejidos normales, la expresión de PRAME suele estar restringida, lo que lo convierte en un modelo útil para investigar la regulación epigenética y el control transcripcional específico de linaje.

Las partículas de activación lentiviral PRAME (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de PRAME en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral PRAME (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción PRAME, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de PRAME. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo PRAME y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.