PPARα Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400238-ACT

PPARα (receptor alfa ativado por proliferadores de peroxissomos) é um fator de transcrição receptor nuclear ativado por ligante que coordena o catabolismo de lipídios e a homeostase energética em células humanas. Ele regula programas gênicos que controlam a β-oxidação mitocondrial e peroxissomal, o transporte de ácidos graxos, a cetogênese e o metabolismo de lipoproteínas, integrando sinais metabólicos a respostas transcricionais por meio de elementos de resposta a PPAR. A atividade de PPARα interage com as vias de sinalização de AMPK e da insulina e modula a expressão de genes inflamatórios por meio de crosstalk com NF-κB e outros receptores nucleares. A desregulação de vias associadas ao PPARA é frequentemente investigada em contextos como síndrome metabólica, dislipidemia, doença hepática gordurosa não alcoólica e remodelamento cardiometabólico, tornando-o um nó central para estudos mecanísticos do estresse celular induzido por lipídios.

PPARα O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PPARA sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PPARα O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PPARA em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PPARA, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PPARα. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PPARA nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PPARα no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PPARα em células tumorais com expressão de PPARA silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.