PP2Cα Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403960-ACT

PPM1A codifica a fosfatase de serina/treonina PP2Cα, um membro da família PP2C dependente de Mg²⁺/Mn²⁺ que contrabalança a sinalização de quinases ativadas por estresse ao desfosforilar componentes-chave das vias. A PP2Cα modula respostas celulares a estímulos genotóxicos e inflamatórios, com funções descritas na regulação de cascatas de MAPK, de saídas de sinalização ligadas ao NF-κB e do controle de checkpoints do ciclo celular. Ao ajustar limiares de sinalização dependentes de fosforilação, a PPM1A influencia apoptose, diferenciação e programas de imunidade inata. A atividade ou expressão desregulada de PP2Cα tem sido associada a alterações na adaptação ao estresse e a fenótipos de sinalização observados em múltiplos contextos relevantes para doenças, incluindo a biologia do câncer e patologias relacionadas ao sistema imune.

PP2Cα O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PPM1A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PP2Cα O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PPM1A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PPM1A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PP2Cα. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PPM1A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PP2Cα no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PP2Cα em células tumorais com expressão de PPM1A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.