PP2B-B1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422386

Panoramica

Ppp3r1 codifica la subunità regolatoria B1 della PP2B (calcineurina B1), un partner essenziale legante Ca2+ che stabilizza e modula l’attività fosfatasica della calcineurina. Attraverso la segnalazione dipendente da Ca2+/calmodulina, la calcineurina controlla la defosforilazione di substrati quali i fattori di trascrizione NFAT, collegando i flussi di calcio a programmi trascrizionali che governano l’attivazione immunitaria, la plasticità neuronale e il rimodellamento muscolare. Nei modelli murini, la segnalazione dipendente da PPP3R1 interseca vie che regolano le risposte del recettore dei linfociti T, la funzione sinaptica e il rimodellamento associato all’ipertrofia cardiaca, risultando quindi rilevante per studi su infiammazione, neurobiologia e segnalazione adattativa allo stress. Un’attività della calcineurina deregolata è ampiamente implicata nel rimodellamento patologico e nella disfunzione immunitaria, facendo di PP2B-B1 un nodo meccanicistico utile per l’analisi delle vie di segnalazione in sistemi rilevanti per la malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PP2B-B1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ppp3r1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ppp3r1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ppp3r1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PP2B-B1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ppp3r1 per lo studio della segnalazione di PP2B-B1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ppp3r1 critici per la funzione di PP2B-B1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ppp3r1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PP2B-B1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal PP2B-B1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ppp3r1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PP2B-B1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR PP2B-B1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ppp3r1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ppp3r1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.