Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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PP2A-Cβ Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422382
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PP2A-Cβ Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico PP2A-Cβ, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PP2A-Cα/β Antibody (1D6): sc-80665
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PP2A-Cβ Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-422382 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Ppp2cb codifica la subunità catalitica Cβ della proteina fosfatasi 2A (PP2A), una delle principali fosfatasi serina/treonina che controbilancia la segnalazione mediata dalle chinasi defosforilando numerosi substrati nel citoplasma e nel nucleo. Gli oloenzimi contenenti PP2A-Cβ regolano la progressione del ciclo cellulare, le risposte al danno al DNA, l’apoptosi e il controllo metabolico attraverso vie che includono la segnalazione PI3K–AKT, MAPK/ERK e Wnt/β-catenina. Nei sistemi murini, l’alterazione dell’attività di PP2A influenza l’omeostasi della fosforilazione e può rimodellare reti di segnalazione spesso implicate nella trasformazione oncogenica e nelle disfunzioni neurobiologiche. Ppp2cb rappresenta quindi un nodo utile per analizzare il controllo, dipendente dalle fosfatasi, di crescita, adattamento allo stress e segnalazione neuronale.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PP2A-Cβ (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ppp2cb in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ppp2cb insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ppp2cb a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PP2A-Cβ.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ppp2cb per lo studio della segnalazione di PP2A-Cβ, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Ppp2cb critici per la funzione di PP2A-Cβ
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ppp2cb per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal PP2A-Cβ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal PP2A-Cβ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ppp2cb. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal PP2A-Cβ Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR PP2A-Cβ (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ppp2cb per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ppp2cb definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.