PP2A-Cα Double Nickaseプラスミド (h): sc-400613-NIC

PPP2CAは、タンパク質ホスファターゼ2A（PP2A）の触媒サブユニットであるCαをコードしています。PP2Aは主要なセリン／スレオニンホスファターゼで、足場サブユニットAおよび多様な制御サブユニットBとヘテロ三量体複合体を形成し、基質特異性を制御します。PP2A-Cαは、細胞周期の進行、DNA損傷応答、細胞骨格ダイナミクスにまたがるリン酸化依存的シグナル伝達を調節し、MAPK、PI3K/AKT、Wnt/β-カテニン経路の制御において重要な役割を担います。主要なキナーゼや構造タンパク質の協調的な脱リン酸化を通じて、PPP2CAはプロテオスタシスとチェックポイント機能の維持に寄与します。PP2A活性の破綻やPPP2CA機能の変化は、複数のがんや神経変性疾患の文脈で観察される異常なリン酸化ネットワークと関連づけられており、シグナル伝達研究における機構的ハブとしての利用を支持しています。

PP2A-Cα ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における PPP2CA 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、PPP2CA内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、PPP2CAの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、PPP2CAが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。