PP2A-Aβ CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-428621

概要

Ppp2r1b は、プロテインホスファターゼ2A（PP2A）の足場サブユニットである PP2A-Aβ をコードしている。PP2A は、触媒サブユニットおよび制御サブユニットを編成して基質特異性と局在を制御する、中核的なセリン／スレオニンホスファターゼ複合体である。PP2A シグナル伝達は、細胞周期の進行、DNA 損傷応答、細胞骨格ダイナミクス、MAPK/AKT 経路の調節など、リン酸化依存的な過程を形作る。複数のネットワークにまたがる脱リン酸化イベントを調整することで、PP2A-Aβ は多様な組織における細胞恒常性とストレス適応に影響を与える。足場成分を含む PP2A サブユニットの機能異常は、増殖シグナルの変化やゲノム安定性の破綻と関連づけられており、疾患関連のシグナル状態の機序研究における重要性を裏づけている。

PP2A-Aβ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるPpp2r1b遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ppp2r1b内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ppp2r1bのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PP2A-Aβタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PP2A-Aβシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ppp2r1b欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PP2A-Aβの機能に不可欠なPpp2r1bエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ppp2r1bゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PP2A-Aβ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびPP2A-Aβ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ppp2r1b遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PP2A-Aβ HDRプラスミド（m）および PP2A-Aβ HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPpp2r1bホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPpp2r1b標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。