POU2F3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-417495

Panoramica

POU2F3 codifica un fattore di trascrizione con dominio POU che regola programmi di espressione genica specifici di linea nelle cellule epiteliali, con ruoli di rilievo nella differenziazione e nel mantenimento di stati specializzati delle cellule tuft/brush. Legandosi a motivi simili all’octamero e coordinando reti trascrizionali, POU2F3 influenza l’identità epiteliale, la segnalazione associata alle funzioni sensoriali e i processi legati alla barriera mucosale. Un’alterazione dell’attività di POU2F3 è stata collegata alla plasticità di linea e a dipendenze trascrizionali specifiche di sottotipo in alcuni tumori di origine epiteliale, incluse varianti del carcinoma polmonare a piccole cellule. In quanto regolatore maestro, viene spesso studiato nel contesto del controllo del destino cellulare guidato dalla cromatina e della rimodulazione dei circuiti dei fattori di trascrizione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO POU2F3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene POU2F3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del POU2F3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto POU2F3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina POU2F3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di POU2F3 per lo studio della segnalazione di POU2F3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni POU2F3 critici per la funzione di POU2F3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di POU2F3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal POU2F3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal POU2F3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus POU2F3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal POU2F3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR POU2F3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia POU2F3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio POU2F3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.