PORCN CRISPR Activationプラスミド (h): sc-413044-ACT

ヒトPORCNは、小胞体に局在する膜結合型のO-アシルトランスフェラーゼをコードしており、WNTリガンドのパルミトレオイル化を触媒します。この修飾はWNTの分泌、細胞外での濃度勾配形成、ならびに受容体との結合に必須です。こうした不可欠なプロセシング段階を介して、PORCNはカノニカルおよびノンカノニカルなWNTシグナル伝達を制御し、β-カテニン依存的転写、細胞運命の決定、増殖、組織パターニングに影響を与えます。PORCN依存的なWNT出力の変化は、発生異常や、WNT経路活性の破綻を特徴とする疾患に関与しており、分化プログラムの機序解明やシグナルネットワークの再配線の研究における利用を支持します。PORCNの機能は、上皮の恒常性、幹細胞生物学、さらに形態形成や腫瘍性シグナル状態に影響する経路間クロストークの研究においても重要です。

PORCN CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PORCNの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PORCN CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PORCN 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPORCN転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PORCNの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPORCN遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPORCN依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPORCN発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPORCN経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。