PON2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403181-ACT

ヒトPON2（パラオキソナーゼ2）は、ほぼ全身の組織で発現する膜結合型のラクトナーゼで、抗酸化活性を有し、脂質過酸化を抑制して酸化ストレス下での膜構造の恒常性維持に寄与します。PON2は、活性酸素種（ROS）の産生を低減し、炎症や代謝調節に関連する経路を含むストレス応答シグナル伝達に影響を与えることで、レドックス恒常性およびミトコンドリア機能を調節します。PON2の発現や活性の変化は、動脈硬化、インスリン抵抗性、腫瘍細胞の生存に関わるプロセスと関連づけられており、酸化バランスの変動が細胞の適応能やシグナル出力を変化させ得ることが示されています。そのため、PON2は内皮機能障害、マクロファージ生物学、ミトコンドリアストレス、ならびに酸化損傷が駆動する表現型のモデルにおいて、しばしば研究対象となっています。

PON2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PON2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PON2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PON2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPON2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PON2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPON2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPON2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPON2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPON2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。