PON1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-422343-ACT

O gene murino **Pon1** codifica a paraoxonase 1 (PON1), uma esterase/lactonase dependente de cálcio predominantemente associada a partículas de lipoproteína de alta densidade (HDL), que hidrolisa diversos organofosfatos e lactonas derivadas de lipídios. A PON1 contribui para a homeostase lipídica ao limitar a modificação oxidativa de lipoproteínas e fosfolipídios de membrana, vinculando sua atividade ao equilíbrio redox e à sinalização inflamatória em contextos vasculares e hepáticos. Alterações na expressão da PON1 ou em sua atividade enzimática têm sido associadas ao metabolismo lipídico desregulado e a maior suscetibilidade ao estresse oxidativo, tornando-a um alvo útil para estudar mecanismos de doenças cardiometabólicas e inflamatórias **in vivo** e em sistemas baseados em células. Em modelos murinos, **Pon1** é frequentemente analisado em conjunto com outras paraoxonases relacionadas para dissecar redundância funcional e efeitos em nível de via na biologia das lipoproteínas.

PON1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Pon1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PON1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Pon1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Pon1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PON1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Pon1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PON1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PON1 em células tumorais com expressão de Pon1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.