PON1 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-422343-ACT

マウスのPon1は、パラオキソナーゼ1（PON1）をコードしている。PON1はカルシウム依存性のエステラーゼ／ラクトナーゼで、主として高比重リポタンパク質（HDL）粒子に結合して存在し、多様な有機リン化合物や脂質由来ラクトンを加水分解する。PON1は、リポタンパク質や膜リン脂質の酸化的修飾を抑えることで脂質恒常性に寄与しており、その活性は血管および肝臓の文脈におけるレドックスバランスや炎症シグナル伝達と関連付けられる。PON1の発現量や酵素活性の変化は、脂質代謝の破綻や酸化ストレス感受性の増大と結び付けられており、in vivoおよび細胞ベースの系で心代謝・炎症性疾患の機序を研究する上で有用な標的（ノード）となる。マウスモデルでは、Pon1はしばしば関連するパラオキソナーゼ群と併せて解析され、機能的冗長性やリポタンパク質生物学に対する経路レベルの影響を解明するために用いられる。

PON1 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Pon1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PON1 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Pon1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPon1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PON1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPon1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPON1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPon1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPON1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。