POLR3GL CRISPR Activationプラスミド (h): sc-413599-ACT

ヒトのPOLR3GLは、RNAポリメラーゼIIIの小サブユニットをコードしており、tRNA、5S rRNA、その他の翻訳能と細胞恒常性に必須なPol III依存性RNAを含む短鎖非コードRNAの転写を支えます。POLR3GLはPol III複合体の組み立てとプロモーター依存的な転写開始に寄与し、その機能は、Pol III由来RNAにより影響を受ける増殖制御、ストレス適応、自然免疫シグナル伝達経路と結び付いています。Pol IIIの転写プログラムの破綻は増殖性および発生・発達に関わる表現型と広く関連するため、POLR3GLは、非コードRNA産生の変化がどのように遺伝子発現ネットワークを再構築するかを研究する上で有用な結節点となります。POLR3GLの機能を調べることで、Pol III活性と転写制御、タンパク質合成需要、疾患関連の細胞状態を結び付ける機構の理解に資する知見が得られます。

POLR3GL CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性POLR3GLの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

POLR3GL CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における POLR3GL 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPOLR3GL転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性POLR3GLの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPOLR3GL遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPOLR3GL依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPOLR3GL発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPOLR3GL経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。