POL H CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401794-ACT

POLHはDNAポリメラーゼη（Pol η）をコードしており、S期においてUV誘発性のシクロブタン型ピリミジン二量体（CPD）やその他の嵩高いDNA付加体をバイパスするための損傷乗り越え（translesion）DNA合成を担う、特殊化したYファミリーポリメラーゼです。停止した複製フォークを伸長させることで、POLHはゲノム安定性の維持に寄与し、DNA損傷応答、ヌクレオチド除去修復、複製後修復経路と協調して働きます。POLHの欠損は病変バイパスの忠実度を低下させ、変異負荷を増加させるため、色素性乾皮症バリアント（xeroderma pigmentosum variant）を含むUV感受性やがん素因の表現型と関連します。そのためPOLHは、複製ストレス生物学、変異原性の機構、ならびにDNA修復選択を制御する経路間クロストークの研究において広く解析されています。

POL H CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性POLHの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

POL H CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における POLH 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPOLH転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性POL Hの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPOLH遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPOL H依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPOLH発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPOL H経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。